Кроме сывороток и цоликлонов для определения групп крови пациентов могут использоваться стандартные эритроциты. Когда применяют перекрестный метод, во время исследования диагностикумы сочетают с сыворотками крови. Для получения таких реагентов используют кровь, взятую из пальца, с установленной групповой принадлежностью. Биоматериал помещается в 4% раствор лимоннокислого натрия в соотношении 3:1, набирается в пробирку, перед проведением исследования центрифугируется.
Подготовка реагентов
В системе AB0 определение группы крови с применением стандартных эритроцитов считается высокоточным методом определения групповой принадлежности крови реципиента. К реагентам предъявляется ряд требований:
- законсервированные эритроциты необходимо хранить в холодильнике при температуре в пределах +4—+6°, при повышении или снижении температуры срок их годности сокращается;
- особое внимание условиям хранения уделяют при транспортировке – нужно не только соблюдать этот диапазон температуры, но и исключить тряску и взбалтывание диагностикумов;
- перед применением флаконы отстаивают вертикально, после вскрытия ампулы надосадочную жидкость удаляют стерильной пипеткой;
- непосредственно для исследования подходит однородный осадок эритроцитов, которые можно собрать снизу;
- вскрытые ампулы желательно использовать в течение максимум 24 часов, то есть, в течение 1 рабочего дня, но начатые можно плотно закрыть и хранить в холоде до 2–3 суток.
Стандартными эритроцитами можно определить не только групповую принадлежность крови, но и резус-фактор. Для такого исследования используются соответственно положительные и отрицательные эритроциты 0 (I). Однако в консервированном биоматериале резус-фактор теряет активность очень быстро – кровь без консервантов для этих целей берут у доноров небольшими объемами.
Ход исследования
Перед началом исследования флаконы со стандартными эритроцитами достают из холодильника и отстаивают в течение нескольких минут, чтобы они согрелись до комнатной температуры. Удаляют верхний слой надосадочной жидкости, флакон встряхивают, чтобы образовалась гомогенная взвесь.
Исследование проводят по нижеприведенному алгоритму:
- пластину маркируют, указывая данные обследуемого лица и специфичность применяемых реагентов;
- тест-эритроциты наносятся по одной крупной капле в строгом соответствии с маркировкой на планшете;
- пипеткой из пробирки забирают плазму или сыворотку, наносят одну каплю рядом с каждым стандартным эритроцитом в соотношении 1:1;
- стерильными палочками перемешивают капли и наблюдают за ходом реакции, одновременно слегка покачивая планшет.
В течение нескольких секунд должна наступить агглютинация, но по часам отмеряют 5 минут, и только после этого оценивают результаты реакции. Перед этим в те ячейки, где уже есть агглютинация, добавляют по 1 небольшой капле хлорида натрия в концентрации 0,9%.
При оценке результатов рассматривают те ячейки, в которых заметна изогемагглютинация – реакция склейки эритроцитов из состава реагентов и крови пациента:
- если она наступает в ячейках А, В и АВ, кровь относится к группе 0 (I), присутствуют антитела α, β;
- если реакция наблюдается со стандартными эритроцитами В и АВ – группа A(II), присутствуют β;
- третья группа крови проявляется агглютинацией с эритроцитами А и АВ;
- при четвёртой группе крови агглютинации быть не должно ни в одной ячейке.
Важно учитывать, что реакция агглютинации может идти очень медленно. Для ускорения необходимо покачивать планшет в разных плоскостях или повторно перемешивать капли стерильными палочками. Если в течение 5 минут реакция не происходит, к каплям добавляют физиологический раствор и еще раз перемешивают.
